黄厚才1，胡元亮2，胡春萍1，彭蕴茹1，丁永芳
【摘要】 目的 观察钩藤散浸膏对衰老模型小鼠智力、乙酰胆碱酯酶（ACHE）、抗氧化酶（SOD）、自由基（MDA）的，探讨其抗衰老作用及机制。
小鼠随机均分为6组，除正常对照组外，各组每天皮下注射D-半乳糖（0.05g/kg），连续注射6周。从注射的第7天开始，3个实验组同时灌胃高、中、低剂量的钩藤散浸膏，阳性对照组灌以维生素E（0.05g/kg）模型对照组与正常对照组每天灌胃等量的蒸馏水，连续给药5周后测定小鼠的训练成绩、记忆成绩及血清SOD、ACHE和脑组织MDA的含量变化。
结果 实验组的训练成绩显著（
P＜0.05），测试成绩极显著（
P＜0.01）好于、血清SOD、ACHE活力极显著（
P＜0.01）高于、脑MDA含量极显著（
P＜0.01）低于模型对照组；与正常组比，除ACHE偏高外，其余各指标相近。
结论 钩藤散能提高抗氧化能力，降低自由基含量，增强胆碱能神经系统功能，从而防止衰老。
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【关键词】 D-半乳糖；钩藤散；衰老；小鼠
【Abstract】 Objective To observe the effects of Goutengsan extract on memory，malondiadehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD），ACHE in mice to study therapeutic effects and mechanism of Goutengsan on aging model.
Methods Mice were randomly divided into 6 groups. All groups，except the control，were administrated （ip） with D-galactose （0.05g/kg） for successive 6 weeks. 3 experimental groups were administrated （ig） with high，middle and low dosages of Goutengsan extract respectively after 7th day of the injection of D-galactose whereas vitamin-E at 0^05g/kg body weight served as a positive control. The model and control groups were daily adminisered with D.D.W. for continuous 5 weeks. After treatments，the SOD，ACHE activity in serum and MDA in brain of rats were determined，the training score and memory grade were also recorded.
Results Goutengsan extract effectively increased the training scores and memory grades. Also，the serum SOD，ACHE activities in Goutengsan extract-treated mice were higher than that in control group. ，the brain MDA content in Goutengsan extract-treated mice was lower than that in control group.
Conclusion This data suggested that Goutengsan extract had a significant anti-oxidative effect by reducing the free radicals as well as an anti-aging effect through the enhancement of cholinergic nerve system.
字串4 【Key words】 D-galactose; goutengsan; aging; mice
老年痴呆是威胁人类健康的重大疾病之一，对其的防治一直是全球关注的焦点。钩藤散源于《本事方》，由钩藤、石膏、陈皮、麦冬、半夏、茯苓、人参、防风、生姜、甘草、菊花等11味药组成，原为肝厥头晕之证的经典方剂。本次实验进行了钩藤散浸膏的抗衰老实验，以观察钩藤散浸膏在抗衰老方面的影响及机制。
1 材料
1.1 药品与试剂 （1）钩藤散：由本院中药制剂室按传统方法水提、浓缩、消毒等制成浸膏。临用前每19ml钩藤散浸膏加蒸馏水配至100ml，变成0.5g生药/ml清膏溶液，实验中所用剂量均以生药量计。（2）维生素E胶丸：厦门鱼肝油厂（批号：10842002）。用前将维生素E胶丸用蒸馏水按10粒/100ml蒸馏水配成溶液。（3）D-半乳糖：国药集团化
学试剂有限公司（批号：20050121）。（4）乙酰胆碱酯酶（ACHE）活性测定试剂盒：南京建成生物工程所（批号：20050225）。（5）超氧化物歧化酶（SOD）活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所（批号：20041221）。（6）丙二醛MDA活性测定试剂盒：南京建成生物工程研究所（批号：20041224）。
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1.2 动物 清洁级KM小鼠：18-22g，雌雄各半，由中科院上海实验动物中心提供，许可证号：SCXK（沪）2002-0010。
1.3 仪器 （1）MG-2迷宫：张家港市生物医学仪器厂生产。（2）高速冷冻离心机：贝克曼产品。（3）721分光光度计：上海第三仪器厂产品。（4）高速分散器XHF-1：上海金达生化仪器厂产品。
1.4 实验环境 清洁级，合格证号：SYXK（苏）2002-0007。
2 方法
2.1 分组、造模、给药 将小鼠分为6组，每组12只，雌雄各半，先进行造模，正常对照组皮下注射等体积生理盐水（1ml/kg），其余各组每天皮下注射D-半乳糖，0.05g/kg体重，连续注射6周。注射7天后开始给药，实验高剂量组每天灌胃给10g生药/kg体重，中剂量组5g/kg，低剂量组2.5g/kg，阳性对照组每天给维生素E 0.05g/kg体重，模型对照组与正常对照组每天给等量的蒸馏水，每天灌胃1次，每次0.2ml/10g体重；连续给药5周。
字串9 2.2 训练［1］ 最后1天给药后1h进行学习训练，训练时，将小鼠放入Ⅰ臂起步区停留3 min后给予电击（35V），按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ或Ⅰ→Ⅲ→Ⅱ→Ⅰ连续试验：a项:小鼠到达安全区停留0.5 min，然后取出放回原臂，1 min后给予下次电击，达到连续2次直接逃至安全区后，以逃入的安全区作为起步区进行电击训练。当小鼠在三臂均达到连续2次直接逃至安全区后，进行b项试验：小鼠在Ⅰ臂起步区停留1 min后给予电击，逃至安全区停留0.5 min，再以此区作为起步区予以电击，连续循环电击训练（每两次电击之间休息1min），以小鼠连续10次（或9/10）正确反应（直接逃入安全区）作为空间辨别记忆指标，每回连续学习的电击总次数一般不超过30次。最后将a项和b项相加作为训练成绩。
2.3 记忆测试 训练后24h进行测试，测试方法同训练，将a项和b项相加作为学习成绩。
2.4 血中SOD、ACHE测定 测试后眼眶取血，3000r/min离心，取上清液按试剂盒说明书所述步骤操作，测定ACHE、SOD活力。
字串8 2.5 脑中MDA的测定 小鼠取血后处死取脑，置匀浆器中，加入预冷生理盐水制成10%（g/ml）的脑匀浆，按试剂盒说明书所述步骤操作，测定蛋白质含量和MDA含量。
2.6 统计学分析 数据用x±s表示，组间比较用t检验。
3 结果 3.1 对学习记忆的影响 模型组训练、测试成绩都极显著差于正常组（
P＜0.01），说明造模成功；实验组训练、测试成绩都和正常组相近，而极显著地好于模型组（
P＜0.01），说明给药后钩藤散浸膏抑制了D-半乳糖所致的衰老，使记忆恢复如常，见表1。
表1 钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠记忆的影响 （x±s，n=12） 字串1
Tab.1 Effects of GTS extract on memory of mice doddery models created by D-galactose
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注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与正常组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；“/”灌以等量的蒸馏水，下同3.2 对血清中SOD活力的影响 见表2。
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表2 钩藤散浸膏对D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD活力的影响 （x±s，n=12）
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Tab.2 Effects of GTS extract on activity of SOD in serum of mice doddery models created by D-galactose 字串2
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从表2可知，实验组血清中SOD活力显著高于模型组（P＜0.05），与正常组较近无明显差异，而模型组血清中SOD活力显著小于正常组（P＜0.05）。说明钩藤散浸膏有助于D-半乳糖所致衰老模型小鼠SOD活力的恢复，从而增强清除自由基的能力。
3.3 对脑中MDA含量的影响 从表3可知，实验组MDA含量显著小于模型组（P＜0.05），与正常组比较接近，差异无显著性，而模型组则显著高于正常组（P＜0.05）。说明钩藤散有助于降低自由基MDA的含量，从而延缓衰老。 字串5
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